Hủ tiếu Mỹ Tho bao gồm thịt lát, thịt bằm, xương và gan heo, có tiệm còn thêm tôm khô vào để nước dùng ngọt hơn. Vị ngọt đậm đà từ nước hầm xương và các phụ gia khác khiến hủ tiếu Mỹ Tho đậm chất miền Tây Nam Bộ. Hủ tiếu Mỹ Tho thường được ăn kèm với phụ gia là giá sống, hành phi, chanh ớt, tiêu, nước tương. Nước chấm là nước tương pha chút giấm và đường, có nơi sẽ có thêm tép mỡ và hành phi.
Hủ tiếu Mỹ Tho ngoài nổi tiếng nhờ nước lèo thơm ngọt vị miền Tây, còn nổi tiếng nhờ cọng hủ tiếu trong và dai, khi nấu không bị bở hay mềm đi. Một bát hủ tiếu Mỹ Tho tại thành phố Mỹ Tho, Tiền Giang thường hấp dẫn thực khách nhờ sự phong phú và đa dạng trong cách chế biến.
Hủ tiếu bò viên hay hủ tiếu sa tế cũng dùng loại bánh này. Ngoài ra, hủ tiếu Mỹ Tho còn nấu chung với mì, hủ tiếu mì, hoặc kết hợp với bánh canh, nui, bột sò… rất đa dạng và phong phú. Đặc biệt, còn có thể ăn hủ tiếu khô, tức là không chan nước lèo trực tiếp, mà để riêng ở chén; hủ tiếu được trộn với nước tương, giấm đường vừa ăn, có thể thêm trứng gà. Khi đó, nước lèo sẽ ngon và ngọt hơn.
Điểm đặc biệt là hủ tiếu Mỹ Tho không ăn với salad hay cần tây. Tuy nhiên, khi du nhập vào Sài Gòn, món này được biến tấu thêm tôm thẻ, lòng heo, sườn heo và trứng cút. Có nơi còn phục vụ kèm bò viên, tương ớt và tương đen.
Sợi hủ tiếu Mỹ Tho làm từ gạo thơm dẻo (nổi tiếng là gạo Gò Cát của làng Mỹ Phong). Sợi hủ tiếu to, trong, mềm nhưng dai, khi trụng không bị bở, có mùi thơm đặc trưng của gạo. Để giữ độ ngon, người ta thường trụng sợi hủ tiếu riêng trong nước sôi, không trụng trực tiếp vào nước lèo. Ngoài các quán ăn cố định, hủ tiếu Mỹ Tho còn được bán dạo bình dân, gọi là “hủ tiếu gõ”.